没食子酸标准。分光光度发应在吸光度没食子酸工作标准曲线的校准范围内，吸光度高于50%g/ml浓度的没食子酸标准工作溶液的吸光度，重新配制高浓度没食子酸标准工作液进行校准。茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物；用分光光度法测定其含量。

在茶叶中提取茶多酚的工艺主要有以下的几种方法：

1.传统工艺：以水或乙醇为溶剂，采用水浴加热至80℃保温提取多次。合并提取液后用等体积的氯仿萃取，分出氯仿相后改用乙酸乙酯多次萃取，将乙酸乙酯大部回收后浓缩近干，冷冻干燥后用去离子水反复重结晶即得精品。但该法的缺点是操作费时麻烦、溶剂消耗量大、毒性大、成本高、提取率低，在高温下提取，茶多酚易氧化变质等。

2.用微波辐射萃取茶多酚：提取溶剂为50％乙醇，功率320瓦，萃取时间18秒，液固比(mL／g)1：9，二级提取，此条件下的茶多酚的提取率为92．7％。与传统的索氏提取相比，微波法提取的最大优点是提取时间大大缩短，且提取率较高。而与超临界二氧化碳萃取相比，它成本低，投资少，提取效率高。但不适合在实验室操作。

三.现根据参考文献及相关数据，得本实验方案：

1.实验原理：利用茶多酚易溶于乙醇、乙酸乙酯，而不溶于氯仿的性质来提取茶多酚。

2.实验器材与试剂：

器材：250ml的三口烧瓶，布袋，蒸发皿，分液漏斗，等；

试剂：茶叶，碳酸钠，乙醇，氯仿，乙酸乙酯，蒸馏水，等。

3.实验步骤：

a)提取：将粉碎的10 g茶叶中加入2g碳酸钠并放入布袋内放好，置于三口烧瓶内，加乙醇50ml，加热煮沸0.5h，倾出提取液至蒸发皿内，再用10ml乙醇洗涤茶叶包，洗涤液并入提取液。

b)分离纯化：将装有提取液的蒸发皿置于石棉网上加热浓缩至提取液体积月约20ml，冷却至室温后将浓缩液移置分液漏斗，加入等量的氯仿萃取2次（萃取时振荡要轻，防止乳化），水层用于制备茶多酚。将氯仿萃取后的水层用等量乙酸乙酯萃取2次，每次20min，合并乙酸乙酯萃取液，水浴减压蒸馏（或旋转蒸发仪）回收乙酸乙酯，趁热将残液移入洁净干燥好的蒸发皿，改用水蒸气浴加热浓缩至近干，冷却至室温后，放入冰箱内冷冻干燥，将白色粉末茶多酚粗品，粗品用蒸馏水进行重结晶，得茶多酚精品。干燥后称量，计算产率。

实验四茶叶中茶多酚含量的测定——高锰酸钾直接滴定法

一、目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作

二、原理

茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。根据消耗1mL mL的高锰酸钾相当于茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。

三、仪器与试剂

仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。

试剂：1、%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000mL，过滤后贮于棕色瓶中。

2、%草酸溶液：准确称取草酸，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。

3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。准确吸取%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中（平行3份），加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80℃水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边滴边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。计算高锰酸钾溶液的百分比浓度。

四、测定步骤

1、供测试液的准备：

准确称取茶叶磨碎样品1g，放在250mL锥形瓶中，加入沸蒸馏水80mL，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100mL，摇匀。

2、测定：

取200ml蒸馏水放入白瓷皿中，加入%靛红溶液5mL，再加入供测试液5mL，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。同时做空白测定。

五、结果计算

X=

式中：X—茶多酚的含量，%，B—空白消耗的高锰酸钾毫升数，mL

A—样品消耗的高锰酸钾毫升数，mLω--高锰酸钾的浓度，%

m—样品的质量g， V1—测定用供测试液的体积，mL，V2--供测试液的体积，mL

实验三茶叶中茶多酚含量的测定——酒石酸铁比色法

一、实验目的：

1、掌握酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量的原理及操作。

2、进一步熟悉721－分光光度计的使用。

二、原理：

茶叶中多酚类物质占茶嫩梢干重的20％～35％，由约30种以上的酚类物质所组成，通称茶多酚。按其化学结构分为四类：（1）儿茶素类，属黄烷醇类；（2）黄酮及黄酮醇类；（3）花白素及花青素，即羟基-［4］-黄烷醇及其钾盐；（4）醋酸及缩酚酸类。其中以黄烷醇类化合物最重要（占多酚的80％左右）。纯儿茶素一般为白色无定形粉末，在空气中极易氧化成棕色物，能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂中。茶多酚能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂。对热、酸较稳定，2%的溶液加热至120℃并保持30min，无明显变化。在碱性条件下易氧化变质。

实验表明，茶多酚清除活性氧自由基作用的活性，为等量维生素C的493倍，且能有效消除脂质过氧化产物丙二醛，具有降血脂的显着功效。还有研究表明，茶多酚还具有抑制痢疾、伤寒、霍乱、金黄色葡萄球菌等有害菌的作用；具有较强的抗放射性作用，以及在抗衰老，抑制瘤细胞，预防心脑血管疾病等方面都显示出很好的效应，是一种有开发前景的天然抗氧化剂。1988年7月我国已批准茶多酚作为食品添加剂。国内已建立了茶多酚工业化生产线，并开发研制出了茶多酚的第二代产品即儿茶素（TC）。

茶多酚的测定方法有高锰酸钾直接滴定法和酒石酸铁比色法，由于高锰酸钾直接滴定法操作比较复杂，且靠肉眼观察颜色判断终点，如果样品溶液颜色较深时，可能影响测定结果。本实验将应用酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量。

酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物，络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。因此可以用比色方法测定。该法可避免高锰酸钾滴定法所产生的人为视觉误差。

三、仪器与试剂：

仪器：分光光度计

试剂：

（1）酒石酸铁溶液：称取 FeSO4·7H2O，含 4个结晶水的酒石酸钾钠，加蒸馏水溶解后，用蒸馏水稀释至1000mL

（2）的磷酸缓冲液： Na2HPO4·12H2O，·2H2O，加蒸馏水溶解后．用蒸馏水稀释至1000mL．

四、步骤：

（l）样品溶液的制备方法：准确称取茶叶磨碎样品1g于200mL三角烧瓶中，加入沸水80mL，在沸水浴中浸提30min，然后过滤、洗涤，滤液倒人100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至刻度，摇匀，备用。

（2）测定：吸取样品溶液 1mL于 25mL容量瓶中，加蒸馏水4mL，加酒石酸铁溶液5mL，摇匀，再加入磷酸缓冲液稀释至刻度。以蒸馏水代替样品溶液加入同样的试剂作空白。选择540nm波长和1cm的比色杯测定吸光度。

五、计算：

式中：ω—茶多酚的含量，%，A—样品溶液的吸光度值，T—样品溶液的总体积，mL

V—测定用样品溶液的量，mL，m—样品质量，g

—用1cm比色杯，当吸光度为时，试液中茶多酚的浓度为mL

六、说明及注意事项：

1、磷酸盐缓冲液在常温下容易生长霉菌，放冰箱中保存或临用时现配。

2、样品溶液制备中的注意事项：

（1）较透明的样液，如果味茶饮料，将样液充分摇匀后，直接取样测定。

（2）较浑浊的样液，如果汁茶饮料、奶茶饮料等，称取充分混匀的样液25mL于50mL容量瓶中，加95%的乙醇15mL充分混匀，放置15min，用水定容至刻度，过滤。

（3）含有碳酸气的样液，如农夫汽茶，量取充分混匀的样液100mL于250mL的烧杯中，称取其总量，于电炉上加热至沸，在微沸状态下加热10min，以将二氧化碳排除，放冷，用水补足原来的质量，摇匀，备用。

测定

准确吸取试液1 ml，注人2 5 m L的容量瓶中，加水4 ml和酒石酸亚铁溶液5 ml，充分混合，再加p H 7. 5磷酸盐缓冲液至刻度，用10mm比色杯，在波长540nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度( A)